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刊期:月刊
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创刊时间:2004年
国内统一刊号:CN15-1333/R
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实验研究
 
慢性疲劳孕鼠模型的建立 2011/6/11
   

                              慢性疲劳孕鼠模型的建立

                      刘      (贵州省贵阳中医学院  贵阳  550002

关键词:慢性疲劳综合征  孕鼠模型  建立

中图分类号:R242              文献标识码:B             文章编号:1672-8351201101-0067-02

    慢性疲劳综合征(Chronic Fatigue SyndromeCFS)是1988年美国疾控中心正式命名并提出相应诊断标准的一种以持续或反复疲劳为主要特征,同时伴有低热、肌痛、头痛、神经心理症状、睡眠障碍等非特异性表现的综合征[12]CFS的病因和发病机制尚未明确,目前普遍认为CFS可能是由于诸多原因作用机体而导致神经-内分泌-免疫网络紊乱的结果。随着社会和经济地不断进步,生活水平地不断提高,慢性疲劳越来越引起人们的重视。近年来,对CFS病因、发病机制及治疗的相关报道较多,流行病学调查也发现该疾病高发于女性,尤其是3150岁受教育程度高,工作压力大的育龄期女性。为深入研究慢性疲劳对女性生殖功能是否存在影响,建立理想的慢性疲劳动物模型是研究得以深入的关键。因此,本研究目的在于建立符合中医特色的慢性疲劳孕鼠模型,现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1实验动物

    健康wistar雌性大鼠30只,体重250±20g,由贵阳医学院实验动物中心提供。

1.2造模与分组

    大鼠适应性饲养一周后,随机选取10只作为正常对照组,其余20只进行造模。采用复合应激因素[3](包括形劳、神劳)加以改进复制慢性疲劳动物模型。具体方法如下:模型组动物每日上午力竭游泳,水温(28±1℃);下午随机给予冷水游泳10min(水温4℃)或夹尾刺激(刺激时间不固定);每日夜间至次日凌晨予12h束缚刺激,连续14天。

1.3实验仪器

    120cm×60cm×60cm(长×宽×高)游泳箱、100cm×100cm×50cm(长×宽×高)开阔箱[45]、秒表。

1.4行为学实验

    分别观测大鼠的一般情况、体质量、探究行为(旷场实验)、体能情况(力竭游泳)。

1.4.1旷场实验:造模前一日及造模结束后次日,分别将两组大鼠轻轻放入开阔箱的正中格内,并开始计时,观察大鼠6分钟内的活动情况。测定指标包括动物的:①水平活动得分(三爪以上跨入邻格的次数);②垂直活动得分(两前肢离地1cm以上的次数)。

1.4.2力竭游泳实验[6]:力竭游泳实验是在造模第一天及最后一天将标记好的两组大鼠放入水深36cm、水温28±1℃的游泳箱中游泳,记录大鼠入水至游泳力竭(头部沉入水中10秒不能浮出水面为力竭标准)的时间。

1.5合笼

    造模结束进行合笼。模型组、空白对照组随机按雌雄比例12与雄鼠合笼,合笼次日检测雌鼠阴道栓并作阴道精子涂片检查,如见阴道栓及涂片检查检出雌鼠阴道内有精子,即记为孕0天,并取出雄鼠;如雌鼠阴道内未见精子则继续合笼,合笼时间为5天(大鼠的动情周期为45天)。

2  

2.1一般情况

    造模结束时,模型组大鼠出现精神委靡不振,眯眼懒动、大便稀、皮毛凌乱无光泽、缩肩拱背、逃避反应能力下降、饮食饮水量下降、体重下降等典型的“疲劳”特征。

2.2实验前后体质量变化(见表1

                            表1 造模前后各组大鼠平均体重变化

组 别

  例数(n)

   造模前    

   造模后   

空白组 

10

  254.93±10.63

  305.84±20.82  

模型组 

20   

257.84±11.10  

251.43±11.14

    注:与本组造模前相比▲:P<0.05,与空白组相比★:P<0.05

2.3旷场实验及力竭游泳观察行为学(见表2

                  表2 造模前后各组大鼠旷场实验及力竭游泳时间测定结果

组 别

时间

例数(n)

  水平运动次数(次)

  垂直运动次数(次)

  力竭游泳时间(min

空白

造模前

10

20.40±9.16

82.50±30.00  

100.40±2.88

造模后

20.60±10.00

87.80±22.27

 103.80±4.57

 

造模前

 

20

19.55±7.32

 66.65±34.47

100.00±3.45

造模后

9.05±4.58        

24.45±18.50

36.75±3.85

    注:与本组造模前相比▲:P<0.05;与模型组造模后相比★:P<0.05   

2.4妊娠率

    合笼结果,其中20只模型组雌鼠仅有9只妊娠,妊娠率仅45%10只空白对照组雌鼠有7只妊娠,妊娠率达到70%

3  

    建立较为理想的慢性疲劳综合征(CFS)模型是开展慢性疲劳研究的难度与基础,以及实验治疗研究的重要手段。而基于本实验的特点,造模采用复合因素(包括形劳、神劳等)。目前大鼠CFS模型建立的方法包括:①单因素造模法[7](强制游泳、慢性束缚、跑台训练);②多因素造模法[7](力竭游泳加剥夺睡眠法、束缚跑台法、悬吊法、冷水游泳加束缚应激、冷水游泳-夹尾加房劳法、慢性束缚-冷水游泳加进食时电刺激法[8]);③药物诱发型模型(肾上腺皮质激素应用-停药法、氢化可的松肌注-冷水游泳法[9])等,每种不同的方法所导致的CFS的机制、出现CFS的时间都不尽相同。

    虽然CFS在中医文献中没有相应的病名,但疲劳作为中医临床常见的症状,早在《黄帝内经》、《金匮要略》等中医古籍中就已有了许多对疲劳的描述,如“懈怠”、“懈惰”、“四肢劳倦”及“四肢不欲动”等描述。《素问·举痛论篇》提到:“劳则气耗”,“劳则喘息汗出,内外皆越,故气耗矣。”阐明了劳损精气的发生机理。目前祖国医学对CFS的发病,多数学者认为是患者的机体正气不足及气机失调,或发于劳役过度,或发于外感时邪,或发于情志不舒、长期焦虑,致肝气失疏而致郁,脏腑阴阳气血受损而致虚,所以邪、郁、虚是CFS发病的关键。多数学者认为其病位在肝、脾、肾为主,尤以肝、脾为多[10]。大量实验研究表明CFS患者下丘脑-垂体-肾上腺轴存在影响,是该轴的负反馈调节不良。由此可见,慢性疲劳综合征是一种涉及多脏腑、多系统功能失调的疾病。

    实践证明,运动致疲劳动物模型的重复性、可靠性较差。本研究在中医基础理论中“劳则气耗”理论指导下,采用中医的神劳、形劳复合因素制备wistar大鼠慢性疲劳综合征模型。而采用慢性多重复合应激的造模方法,重复性、可靠性高,更能模拟人类慢性疲劳的发生发展;且证明了慢性疲劳综合征是一种涉及多脏腑、多系统功能失调的疾病。因此,笔者认为该模型研制是成功的,同时符合慢性疲劳的发生发展及中医特色。

参考文献

[1]Holmes GPKaplan JEGantz NMet a1Chronic Fatigue SyndromeA Working Case Difinition [J].Annals Of Internnal Medicine1988108387389.

[2]Fukuda KStraus SEHickie Iet a1The Chronic Fatigue SyndromeA Comprehensive Approach to Difinition and Study [J].Annals Of Internnal Medicine199412112):953959.

[3]曹继刚,周安方,等.中医疲劳综合征大鼠模型的建立[J].湖北中医杂志,2008301):7-8.

[4]Elliott PJChan JParker YMNemeroff CBet al:Behavioral effects of neurutensin in the open field [J]. Structure activity studies19863812:259-265.

[5]严进.应激对大鼠行为和部分脑区谷氨酸含量的影响[J].心理学报,1995274):422-427.

[6]张俊慧,胡兵,沈思钰,蔡辉,等.复方消疲悦意饮对实验性慢性疲劳大鼠行为学的影响[J].医学研究生学报,200821[8]817-819.

[7]郑娟娟,赵毅,姚斐.慢性疲劳综合征的动物造模方法研究概况[J].时珍国医国药,20092092289-2291.

[8]刘晓兰,王天芳,刘雁峰,等.消疲怡神口服液对慢性疲劳大鼠骨骼机能量代谢的影响[J].河南中医,2000201):26.

[9]武淑娟,张青川,何采辉,等.电针对复合应激致慢性疲劳大鼠下丘脑组织中单胺类神经递质含量的影响[J].针刺研究,2006312):96-99.

[10]王天芳,张翠珍,季绍良,等.慢性疲劳综合征病人的疲劳特征及中药的治疗作用[J].中华中医药杂志,2000,(4):60-62.

 
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