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刊期:月刊
国内定价:每期12元 ,全年144元
创刊时间:2004年
国内统一刊号:CN15-1333/R
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实验研究
 
田基黄水煎液对应激+高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的影响 2011/9/6
   

胡向阳1    2  李莉莉2

1.中山大学附属第五医院  珠海  5190002.暨南大学生命科学院  广州  510632

摘要:目的: 观察田基黄水煎液对应激+高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的影响。方法:60Wistar雄性大鼠随机分为4:正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组、田基黄水煎液组,建立应激负荷下的高脂血症模型,检测各组大鼠血脂、T淋巴细胞亚群的变化。结果: 田基黄水煎液降低应激+高脂血症模型大鼠血脂代谢紊乱水平,升高CD4、降低CD8的表达。结论:田基黄水煎液对应激负荷下高脂血症大鼠的血脂、免疫功能有改善作用。

关键词:田基黄  高脂血症  应激  T淋巴细胞亚群

中图分类号: R285.5       文献标识码: B          文章编号:

作者简介:胡向阳(1975-),男,主治医师,研究方向:脑血管及代谢疾病

 

应激使机体产生系列防御反应,涉及到神经、内分泌及免疫等生理功能,持续的应激负荷会使小鼠肠系膜脂肪酶活性降低,导致机体血脂代谢紊乱[1]。高脂血症是导致动脉粥样硬化的首要危险因素,因高脂肪饮食致使血脂增高,动脉内沉积过量的胆固醇类脂质物质,内皮源性舒血管物质减少,炎症因子表达增多,白细胞黏附、聚集、游出,形成粥样板块[2]。田基黄为藤黄科金丝桃属植物地耳草的干燥全草,具有清热散瘀、消肿解毒的功效,药理研究表明具有保护肝脏、调节免疫、抑制癌细胞及抗氧化等作用[3,4]。本研究拟通过观察田基黄水煎液对应激+高脂血症模型大鼠血脂、免疫功能的作用,探讨其对应激负荷下高脂血症大鼠的血脂代谢及免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1实验动物 

Wistar大鼠,SPF 级,雄性,体重200±20g,由南方医科大学实验动物中心提供,合格证号:粤检证字2009C218,室温适应性饲养1周后用于本实验。

1.2实验药物

辛伐他汀(商品名:舒降之),杭州默沙东制药有限公司生产,批准文号H1999036620mg/片,临用前以生理盐水溶解浓度为2mg/mL。田基黄饮片由广东省中医院提供,水煎液制备:田基黄3.0 kg,以每克生药加水6ml,冷水浸泡40min后,开始武火煎煮,煮沸后用文火慢煎3Omin,趁热过滤。煎煮第二遍按每克生药加水4ml,煎法同上,合并滤液。60恒温下旋转蒸发浓缩,浓缩为含生药2.25g /m1的水煎液,置4冰箱保存备用。

1.3 试剂与仪器 

高脂饲料(0. 2%胆酸钠+2%胆固醇+10%食用油+87. 8%基础饲料),胆固醇、胆酸钠、丙基硫氧嘧啶(广州天马精细化工厂),10%泰洛沙泊((批号2009030046,上海复星药业有限公司)胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(中生北控生物科技有限公司);兔抗大鼠CD4CD8等单克隆抗体试剂盒(浙江东瓯生物工程有限公司)。全自动生化分析仪(日本日立-7060型); FACS Calibur流式细胞仪(BD-TY1218)。

1.4动物分组

Wistar大鼠60只,数字随机分组法分为4组,即正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组、田基黄水煎液组。

1.5动物模型制备

除正常对照组外,参照Bozoky[5]等方法建立大鼠高脂血模型,大鼠腹腔注射10%泰洛沙泊溶液5ml/kg ,禁食12h后进行试验。辛伐他汀组、紫檀芪组均以10mg/kg剂量灌胃,正常对照组、模型对照组则以等体积生理盐水灌胃。参照何蓉蓉[6]等方法,除正常对照组外,其余各组大鼠在给药后2h ,放进大鼠束缚装置,束缚应激负荷12h,束缚应激期间禁食禁水,连续8周。动物处死前禁食12h,腹腔静脉取血,分离血清,取出脾脏。

1.6指标检测

将采取的新鲜血加入含肝素抗凝的试管中,混匀,43500/分离心 15 分钟,收取上清液(血清)。采用酶比色法使用全自动生化分析仪测定TCTGHDL-CLDL-C,操作步骤均按照试剂盒说明书进行,并依据公式计算动脉粥样硬化指数(Atherosclerotic indexAI),计算公式:AI=(TC-HDL-C)/HDL-C。将脾脏置于玻璃匀浆器中,添加PBS溶液研磨,4℃ 1000 r·min-1离心10min,弃上清液,加入红细胞裂解液,静置5 min后,加PBS溶液终止裂解反应,离心5 min,弃上清液,PBS溶液调整脾脏淋巴细胞数为5×106/mL,取流式细胞分析专用管,每管加入细胞悬液100μL,分别加入CD4CD8抗体,室温避光孵育30min后,各管加入500μL PBS溶液,振荡混匀后上流式细胞仪分析。

1.7统计学处理

使用SPSS14.0统计软件对数据进行重复测量资料的方差分析,定量指标以(x±s)表示,方差分析,组间两两比较采用q检验,P0.05认为差异有统计学意义。

2  

2.1 各组大鼠血脂代谢情况

  与正常对照组比较,各实验组大鼠血清TCTGLDL-CAI含量均有不同程度的升高(P0.01P0.05);HDL-C含量降低(P0.05)。与模型对照组比较, 辛伐他汀组、田基黄水煎液组TCTGLDL-CAI含量均有不同程度的降低(P0.01P0.05)HDL-C含量升高(P0.05)。与辛伐他汀组比较, 田基黄水煎液组TCLDL-CAI含量降低(P0.05)。(见表1)。

1  各组大鼠血脂情况比较 (n =15mmol/L`X ± S)

组 别

TG

 TC

HDL-C

LDL-C

AI

正常对照组

0.43±0.01

1.69±0.11

1.25±0.13

0.37±0.01

0.34±0.02

模型对照组

3.25±0.141)

24.51±1.461)

0.59±0.012)

8.44±0.121)

39.22±2.231)

辛伐他汀组

0.77±0.012,3)

13.29±1.351,4)

0.87±0.022,4)

2.48±0.122,4)

12.14±0.361,3)

田基黄水煎液组

0.83±0.012,3)

6.71±0.181,3,5)

0.83±0.032,4)

0.72±0.012,3,5)

5.51±0.271,3,5)

注:与正常对照组比较,1)P0.01, 2)P<0.05;与模型对照组比较,3)P0.01, 4)P0.05;与辛伐他汀组比较,5)P0.05

2.2 各组大鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化  

与正常对照组比较,模型对照组大鼠脾脏CD8+显著升高(P0.01)CD4+CD4+/CD8+均显著降低(P0.01);田基黄水煎液组CD8+ 升高(P0.05);辛伐他汀组CD4+CD4+/CD8+均降低(P0.05)。与模型对照组比较,辛伐他汀组CD8+降低(P0.01)CD4+/CD8+升高(P0.01);田基黄水煎液组CD4+CD4+/CD8+均显著升高(P0.01)CD8+降低(P0.01)。与辛伐他汀组比较,田基黄水煎液组CD4+升高(P0.05)。(见表2)。

2 各组大鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化比较 (n =7,`X ± S)

 组 别

   CD4+  (%)

   CD8+  (%)

CD4+/CD8+

正常对照组

36.27±3.26

11.46±1.33

2.41±0.12

模型对照组

 19.34±1.131)

 48.23±2.121)

 0.46±0.011)

辛伐他汀组

 24.17±2.322)

 16.67±1.253)

  1.52±0.122,3)

田基黄水煎液组

  39.18±3.123,5)

  20.22±1.312,3)

 1.93±0.113)

注:与正常对照组比较,1)P0.01,2)P0.05;与模型对照组比较,3)P0.01,4)P0.05;与辛伐他汀组比较,5) P0.05

3  

精神压力增大成为现代社会人们生活的主要特征,应激是机体的非特异保护适应机制,如果劣性应激原持续作用于机体,将导致神经-内分泌代谢紊乱,使糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、血脂紊乱等发病率升高[7]。以剥夺身体自由活动、束缚制动刺激为应激原造成的应激称为束缚应激,束缚应激模型与当今社会人们精神应激和活动减少的生活方式相近,是目前实验医学领域最普遍应用的应激原。免疫系统是机体应激反应系统的重要组成部分,应激可引起机体一系列非特异性神经-内分泌反应,长期的应激负荷能破坏免疫器官的正常结构,在脾脏和胸腺中可见典型凋亡细胞[8]T淋巴细胞是机体免疫细胞,T细胞分为CD4+T细胞、CD8+T细胞两大亚群,CD4+T 细胞主要是 Th(辅助细胞),可分泌 IL-2IL-3TNF等细胞因子,参与机体的炎症反应、免疫调控。CD8+T 细胞为 Ts(抑制细胞),通过“抑制性”细胞因子而抑制免疫应答反应,CD4+T/CD8+T比值减少是机体免疫缺陷的重要指征[9]

高脂血症属中医“湿浊”之范畴,是由于饮食不节,肝气郁结,脾运失健,水谷精微化生异常,饮食中的糟粕、杂质混入营血,形成“湿热痰浊毒”,治疗常以疏肝健脾为主。本实验在应激+高脂血症大鼠模型基础上,选用辛伐他汀作为对照药物,辛伐他汀是临床上应用广泛的调脂药,研究发现其还具有抗炎、免疫调节作用、改善血管内皮功能、稳定和逆转粥样硬化斑块等作用[10]。本实验结果发现:田基黄水煎液可以降低应激+动脉粥样硬化大鼠血清TCTGLDL-CAI的含量,与辛伐他汀组比较, 田基黄水煎液组TCLDL-CAI含量降低,有显著的降低血脂代谢紊乱水平作用。田基黄水煎液可使模型大鼠CD4+CD4+/CD8+显著升高(P0.01)CD8+降低,增强大鼠免疫应答功能。田基黄水煎液的上述药理效应可能与其“清热散瘀、消肿解毒”作用相关。此外,田基黄的保护肝脏作用可能会降低因束缚应激所致的血脂代谢紊乱、免疫功能失调,进而缓解高脂血症的发生、发展进程。本实验结果提示田基黄水煎液对应激负荷下高脂血症模型大鼠血脂代谢、免疫功能有改善作用,但其作用或调控机制需要进一步研究。

参考文献

[1]Kurihara H, Yao XS, Nagai H. Anti-stress effect of BRAND’s essence of chicken (BEC) on plasma glucose levels in mice loaded with restraint stress[J]. Journal of Health Science,2006, 52(3): 252-258.

[2]任涛,李枚娟,王焱.动脉粥样硬化与炎症反应关系的研究进展[J].中国老年学杂志,2010,30(10):1464-1466.

[3]张琳,金媛媛,田景奎.田基黄的化学成分研究[J].中国药学杂志,2007,42(5):340-342.            

[4]陈天宇,余世春.田基黄化学成分及药理作用研究进展[J].现代中药研究与实践,2009,23(2):78-79.

[5]Bozoky Z,Balogh L,Mathe D,etal.Evaluation of rat and rabbit sera lipoproteins in experimentally induced hyperlipidemia by analytical ultracentrifugation[J].Euroan Biophysics Journal,2006,3(35):205-213.

[6]何蓉蓉,栗原博,宝丽,.王老吉凉茶对氧化应激负荷小鼠脂代谢的影响[J].中国实验方剂学杂志,2008,14(10):31-33.

[7]Grippo AJ,Johnson AK. Stress,depression, and cardiovascular dysregulation:a review of neurobiological meehanisms and the integration of research fromPreclinical disease models[J].Stress,2009 12(l):l-21.

[8]赵福东.应激时内分泌变化对免疫功能影响的研究进展[J].国外医学:内分泌学分册,2005, 25(4):241-242.

[9]白云峰,袁芳,连玉龙,.慢性应激大鼠T淋巴细胞免疫功能的改变[J].新疆医科大学学报,2010,33(4):369-371.

[10]Li H,Forstermann U.Prevention of atherosclerosis by interference with the vascular nitric oxide system[J].Curr Pharm Des,2009,15(27):3133-3145.

 
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